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GB4789.4-202*《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物檢驗 沙門氏菌檢驗》征求意見稿和2023版《國家食品污染和有害因素風(fēng)險監(jiān)測工作手冊》[1]，最大的變動之一是將SC更換為RVS。 RVS作為一個新的培養(yǎng)基被列入了食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)的檢測行列，但GB4789.28-2013《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗 培養(yǎng)基與試劑的質(zhì)量要求》[2]及其征求意見稿中均未列入該培養(yǎng)基，如何對其進(jìn)行質(zhì)控？各廠家的RVS增菌效果是否相同？對此，我們做了相關(guān)驗證。
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RVS肉湯的原理
培養(yǎng)基中大豆胨提供菌體細(xì)胞生長所需的碳源、氮源等；氯鹽可以提高培養(yǎng)基體系的滲透壓，磷酸鹽作為緩沖體系維持培養(yǎng)基酸性環(huán)境（pH 5.2±0.2），孔雀綠可以抑制非沙門氏菌屬細(xì)菌的生長。該培養(yǎng)基的選擇性表現(xiàn)在高滲透壓、低pH值以及孔雀綠的抑菌效果[3]。
圖:3：RVS肉湯
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RVS肉湯的質(zhì)控方法及比對結(jié)果
對比國內(nèi)外5個廠家（A?B C D E，其中A為陸橋）的RVS增菌液，按照GB 4789.28-2013 《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗 培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量要求》附錄D中SC增菌液的質(zhì)控方法，對RVS增菌液進(jìn)行驗證，結(jié)果無顯著性差異。
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RVS肉湯的進(jìn)一步驗證
各廠家RVS增菌液質(zhì)控結(jié)果無顯著性差異，是否在實際檢驗中增菌效果就一致呢？樣品中通常含有大量的雜菌，我們模擬實際檢測將非目標(biāo)菌含量提高，參考質(zhì)控方法，選用不同血清型的沙門氏菌與大腸埃希氏菌ATCC25922混合。選擇低于標(biāo)準(zhǔn)要求的16h和標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi)的20h，觀察增菌速度和增菌效果，開展了進(jìn)一步的驗證試驗。
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實驗方法：
不同血清型的沙門氏菌（接種量小于50CFU）與大腸埃希氏菌ATCC25922?(接種量為106CFU)混合后接種RVS增菌液，于42℃±1℃培養(yǎng)，分別于16h和20h取增菌液，稀釋到適宜濃度后轉(zhuǎn)接到沙門氏菌顯色（SA）（陸橋二代）平板上進(jìn)行計數(shù)，觀察目標(biāo)菌和非目標(biāo)菌的生長情況。在SA培養(yǎng)基上，目標(biāo)菌沙門氏菌呈紫紅色，大腸埃希氏菌為無色。
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菌株信息：
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結(jié)果：?
對于ATCC14028,CMCC(B)50976和CICC25045，廠家A和廠家D對目標(biāo)菌的增菌效果最優(yōu)，廠家A、D、E的抑制性最優(yōu)。（見附錄1?以ATCC14028為例）
對于ATCC29934,ATCC12325,CMCC50115和ATCC13076，廠家A對目標(biāo)菌增菌效果最優(yōu)，廠家A和D的抑制性最優(yōu)。（見附錄2?以ATCC12325為例）
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結(jié)論：
由多個實驗結(jié)果可以得出，綜合7株沙門氏菌的增菌效果和大腸埃希氏菌的抑制性，廠家A（陸橋）最佳。廠家A（陸橋）可較好的抑制非目標(biāo)菌--大腸埃希氏菌的生長，有效避免了其對沙門氏菌產(chǎn)生的競爭性抑制，同時能夠保證目標(biāo)菌沙門氏菌良好的促生長能力。
? 廠家B和廠家C的表現(xiàn)基本一致，主要是抑制性較差，按照該實驗方法，7次混菌實驗都有大量非目標(biāo)菌的生長，這會增加日常檢測的工作量，且對于腸道沙門氏菌雙相亞利桑那亞種存在漏檢的風(fēng)險。
? 廠家D的表現(xiàn)與廠家A相似，但是對于腸沙門氏菌腸亞種鼠傷寒血清型CMCC(B)50115和腸道沙門氏菌亞種ATCC13076生長較差，對于腸道沙門氏菌雙相亞利桑那亞種ATCC29934和ATCC12325的增菌速度慢且數(shù)量少，也存在漏檢風(fēng)險。
廠家E的主要問題是對大多數(shù)目標(biāo)菌的增菌能力較弱，有時會低其他廠家1個數(shù)量級。
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附錄1：
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圖4：培養(yǎng)16h，5個廠家接種混菌ATCC14028+ATCC25922的生長情況，涂布SA
從上到下依次為A?B C D E
圖5：培養(yǎng)20h，5個廠家接種混菌ATCC14028+ATCC25922的生長情況，涂布SA
從上到下依次為A?B C D E
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附錄2：
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圖6：廠家A（陸橋）在16h（上）和20h（下）的混菌ATCC12325+ATCC25922生長情況
圖7：廠家B在16h（上）和20h（下）的混菌ATCC12325+ATCC25922生長情況
圖8：廠家C在16h（上）和20h（下）的混菌ATCC12325+ATCC25922生長情況
圖9：廠家D在16h（上）和20h（下）的混菌ATCC12325+ATCC25922生長情況
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圖10：廠家E在16h（上）和20h（下）的混菌ATCC12325+ATCC25922生長情況
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附錄:3
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參考文獻(xiàn)
[1]2023年國家食品污染和有害因素風(fēng)險監(jiān)測工作手冊[S]
[2]?GB4789.28-2013，《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 培養(yǎng)基與試劑的檢查要求》[S]
[3]李瑾,劉振,何艷玲.微生物干粉培養(yǎng)基質(zhì)控圖解手冊[M].北京科學(xué)技術(shù)出版社,2007.