受寒潮影響，我國多地區(qū)出現(xiàn)大范圍低溫雨雪凝凍天氣，戶外低溫，室內(nèi)環(huán)境溫度也隨之受到較大影響。在ELISA檢測工作中，實驗室環(huán)境溫度如何控制呢？檢測過程中還有哪些注意事項……小編給您實戰(zhàn)經(jīng)驗分享。

ELISA試劑盒檢測技巧及經(jīng)驗分享

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酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測法具有敏感性高，特異性強(qiáng)，快速等特點，目前廣泛應(yīng)用于農(nóng)獸藥、真菌毒素殘留檢測。但該方法從加樣、洗板、顯色到讀數(shù)步驟繁多，其中的每一步控制不好都可能影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。因此，在實際測定操作中一定要注意以下幾點。

一、溫度

1. 試劑盒回溫

大多數(shù)ELISA檢測試劑盒為冷藏（2℃-8℃）保存。從冰箱拿出來后，先不要急于打開試劑盒，要等試劑盒的溫度平衡至室溫且試劑盒盒表面無冷凝水。檢測所用的試劑需充分混勻且徹底溶解后再用。

Tip：提前1~2小時取出試劑盒，放在室溫中；或在預(yù)設(shè)25℃恒溫培養(yǎng)箱中平衡30分鐘~60分鐘。

2. 環(huán)境溫度的控制

實驗室可采用以下措施控制溫度：

1）實驗室應(yīng)配備溫濕度表，且確保定期計量。

2）根據(jù)天氣情況設(shè)定實驗室空調(diào)制冷或加溫功能，待室溫穩(wěn)定且無干擾的條件下再開始檢測流程。

3）選用帶溫控裝置的孵育儀器，如恒溫孵育器、恒溫培養(yǎng)箱、多功能酶標(biāo)儀等。注意要提前開啟預(yù)熱。

Tip：大多數(shù)試劑盒加樣后反應(yīng)時間較短，環(huán)境溫度對檢測結(jié)果會有很大影響，所以控制好環(huán)境溫度是保證試劑盒檢測結(jié)果有效的重要因素。

3. 孵育

孵育時要保證溫度均勻，防止揮發(fā)變干。孵育時使用封板膜，并置于暗處孵育。多塊板一起實驗時，要平放各板，不要疊放，避免溫度擴(kuò)散的不均勻性或邊緣效應(yīng)。

圖1 ?ELISA試劑盒檢測孵育中

二、剩余試劑的妥善保存

試劑盒恢復(fù)至室溫后，取出要使用的酶標(biāo)板孔，未使用的酶標(biāo)板孔應(yīng)及時放回鋁箔袋，加入干燥劑，封緊封口，2℃-8℃冷藏保存。

Tip: 切忌將未完全平衡至室溫的酶標(biāo)板放回鋁箔袋，因為此時由于溫度差，酶標(biāo)板上會有水汽，不利于穩(wěn)定保存。

三、加樣

1. 加樣要快速準(zhǔn)確，時間宜控制在 15 分鐘內(nèi)。

2. 如樣品量較大，可分次完成實驗，或?qū)y樣液置于預(yù)混微孔板中使用多通道移液器快速移取。

3. 如吸取同一試劑，可將試劑倒入V型加樣槽中，使用多通道移液器快速移取。

Tip：在加樣槽上套上一次性PE手套，再倒入檢測用試劑，可以保證試劑完整性且不被污染。加樣槽更換一次性手套后可繼續(xù)下一種試劑的使用。

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? 四、手動洗板操作指南

?　? 1. 當(dāng)洗滌緩沖液有結(jié)晶析出時，可用手反復(fù)揉搓瓶體使結(jié)晶物充分溶解再配制。

2. 加洗液要快速，沒有多道移液器可以使用洗瓶。洗液應(yīng)新鮮配制，以免被其他試劑污染，或染菌。

3. 加好洗液后輕輕搖動微孔板。甩板倒液要迅速干脆。倒液后在吸水紙上拍干，選用無粉塵和碎屑的優(yōu)質(zhì)吸水紙。需要用力拍板，使孔內(nèi)沒有可見液體掛壁。

4. 不能讓樣品干太久。酶標(biāo)板拍干后立即做后續(xù)的加液。

? ?Tip：拍板用的吸水紙可選擇廚房用紙，吸水性好且無碎屑。為保證微孔洗液浸泡時間一致，可采用從前至后和從后至前的順序交替加洗液的方法。

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? 五、預(yù)實驗的必要性

?　??1. 通過預(yù)實驗可以熟悉整個實驗的流程，發(fā)現(xiàn)可能忽略的問題；

2. 可以測試樣本和試劑盒是否匹配，一旦出現(xiàn)不匹配的情況，不至于浪費(fèi)過多樣本；

3. 可以對樣品中目的分析物的濃度作一下大致參考，以確定合適稀釋度。

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關(guān)注以上幾個方面，希望對大家的ELISA檢測工作起到一定的幫助。