乳制品是營養(yǎng)豐富、經(jīng)濟(jì)實(shí)惠的優(yōu)質(zhì)蛋白且極易遭受致病菌的污染，而沙門氏菌是乳品檢測最普遍的項(xiàng)目，且沙門氏菌不分解蛋白質(zhì)，被沙門氏菌污染的乳品常常不發(fā)生明顯腐敗，不易被發(fā)現(xiàn)，所以沙門氏菌的檢測不能止步于選擇性分離的步驟，應(yīng)共同參考生化試驗(yàn)和血清學(xué)鑒定的結(jié)果來確定是否檢出沙門氏菌。
首先了解一下沙門氏菌屬的生化反應(yīng)，如下圖【參考《沙門菌屬血清型診斷》朱超，許學(xué)斌編著】：
其中，傷寒沙門氏菌產(chǎn)酸不產(chǎn)氣；亞利桑那菌可分解乳糖；豬霍亂、多數(shù)甲型副傷寒、仙臺、馬流產(chǎn)、雞、貝塔及一些傷寒沙門菌血清型等不產(chǎn)硫化氫或僅產(chǎn)生少量硫化氫。
沙門氏菌屬的種類繁多，抗原結(jié)構(gòu)復(fù)雜，截止2007年1月WHOCC-Salm出版的WKLM表解第9版已包括2579個血清型。
沙門氏菌的生化和血清學(xué)鑒定試驗(yàn)的操作較繁瑣，也有較多的操作點(diǎn)需要注意，否則檢測結(jié)果容易出錯，下面咱們一起來學(xué)習(xí)一下。
生化試驗(yàn)
1.三糖鐵瓊脂和賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)
根據(jù)GB4789.4-2016的表1中沙門氏菌屬的典型菌落特征描述，從選擇性瓊脂平板上分別挑取2個以上典型或可疑菌落（用接種針自菌落中心挑?。苯咏臃N于三糖鐵瓊脂和賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基，同時用接種環(huán)挑取相同菌落劃線營養(yǎng)瓊脂平板進(jìn)行純化，36℃±1℃培養(yǎng)16h-24h，必要時可延長培養(yǎng)至48h。
1.1三糖鐵試驗(yàn)
注意??三糖鐵瓊脂接種時先在斜面劃線，再于底層穿刺，但高層穿刺時接種針不能穿到底部，接種太深，否則有些菌產(chǎn)生的硫化氫會布滿試管底部，影響底層培養(yǎng)基顏色變化的觀察。
建議接種后的三糖鐵瓊脂安瓿瓶用封口膜輕輕的覆蓋在瓶口，防止培養(yǎng)過程中培養(yǎng)基失水干縮后氧氣進(jìn)入，底部的黃色被氧化變色，影響結(jié)果觀察；再用接種針在封口膜上扎些小孔利于培養(yǎng)過程中氧氣的供應(yīng)。
1.2賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)
原理：某些細(xì)菌在酸性厭氧環(huán)境，且有賴氨酸底物存在的情況下能誘導(dǎo)產(chǎn)生賴氨酸脫羧酶，使賴氨酸脫羧產(chǎn)生堿性物質(zhì)尸胺，導(dǎo)致培養(yǎng)基變紫，但不產(chǎn)生賴氨酸脫羧酶的細(xì)菌只能代謝葡萄糖產(chǎn)酸培養(yǎng)基變黃。
注意??在進(jìn)行賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)時，注意要挑取同一個待檢菌落同時接種氨基酸脫羧酶對照管和賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)管各一支，接種后在對照管和試驗(yàn)管液面上方均需加無菌液體石蠟（一定要是無菌的）覆蓋。
您是否疑問為什么非要加無菌的液體石蠟？
由于氨基酸脫羧的產(chǎn)物尸胺、腐胺等遇氧不穩(wěn)定，所以需要加無菌液體石蠟覆蓋隔絕空氣，保持胺的穩(wěn)定性，確保試驗(yàn)結(jié)果的真實(shí)性。
鼠傷寒沙門氏菌
ATCC 14028
1.3生化結(jié)果初步判斷
根據(jù)三糖鐵瓊脂和賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)結(jié)果，參考GB4789.4-2016中表2來初步判斷是否有可疑的沙門氏菌。
根據(jù)表2的描述，如果遇到①三糖鐵瓊脂的試驗(yàn)管底部變紅；②整個三糖鐵瓊脂試管為黃色，并且賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)為陰性的試驗(yàn)結(jié)果時，說明該菌株為非沙門氏菌，不需再做后續(xù)的生化試驗(yàn)。